A concentraçäo de interferon humano de membranas amnióticas: II - métodos químicos / Concentrations of the human amniotic membrane interferon: II - Chemical methods

Foi investigada a concentraçäo do interferon humano de membranas amnióticas (IFN-MA) por precipitaçäo através de métodos químicos. O IFN-MA foi produzido em âmnios infectados com o vírus da doença de Newcastle em meio contendo diferentes concentraçöes de soro. A atividade anti-vírica das preparaçöes foi titulada em células Vero infectadas com o vírus da encefalomiocardite de camundongo ou o vírus Sindbis. A precipitaçäo de IFN-MA, consideradas baixas. Empregando-se sulfato de âmnio em preparaçöes com 1//de soro, pode-se recuperar quantidades acima de 60//. O método mais adequado de concentraçäo de IFN-MA contendo 1//de soro foi a precipitaçäo com ácido tricloroactico e ressuspenso do matrial com tampäo clorto pH2, com recuperaçöes em torno de 100//da atividade. As tentativas de concentrar IFN-MA preparado sem soro por estes métodos näo permitiu uma precipitaçäo adequada

Purification of human anmiotic membrane interferon by affinity chromatography

A purificaçäo do interferon humano de membranas amnióticas foi realizada para se obter preparaçöes purificadas para sua caracterizaçäo físico-química, estudo de suas atividades biológicas e ensaios terapêuticos. O interferon foi produzido em doença de Newcastle ou o vírus Sendai. A determinaçäo da atividade anti-vírica foi feita em células Vero infectadas com o vírus da encefalomiocardite de camundongo. As preparaçöes de interferon foram concentradas por precipitaçäo por ácido tricloroactivo e cromatografadas em "Blue-Sepharose- concanavalina A, Sepharose ligada ao dipeptídeo triptofnio (trf) - triptofânio ao dipeptídeo triptofânio-tirosina (tyr). Com a "Blue-Sepharose", o pH ótimo de ligaçäo do interferon foi 5,4. A aplicaçäo em batelada mostrou que foram ligadas 37.000 unidades de interferon por ml de gel, sendo portanto, mais eficiente que a aplicaçäo em coluna, na qual somente foram ligadas 17.750 unidades por ml de gel. As fraçöes do pico de atividade foram purificadas 274 vezes, com 12//de recuperaçäo do interferon em um experimento, com um total de 78//de recuperaçäo e um fator de purificaçäo atingido foi de apenas 6,7; os ligantes Sepharose trp-trp e trp-tyr mostraram uma ligaçäo baixa do interferon, menor que 10.000 unidades por ml de gel